ABSTRACT
Objetivo. Evaluar la actividad inhibitoria in vitro de los extractos de Plantago major «llantén» y Piper aduncum «matico» sobre Fosfolipasa A2 (PLA2) del veneno de la serpiente Lachesis muta muta. Materiales y métodos. Esta investigación fue de tipo explicativa con diseño experimental. Se recolectaron hojas de P. major y P. aduncum en la provincia de Huarochirí en Lima, Perú. Se prepararon extractos alcohólicos diluidos en agua destilada y se realizaron los ensayos fitoquímicos, la cuantificación de fenoles y flavonoides, la cromatografía de capa fina (CCF) en celulosa y la actividad enzimática con PLA2. Se analizó la capacidad de inhibir la PLA2 con los extractos en estudio y sus fracciones. Para el análisis estadístico se utilizó la prueba de Kruskal Wallis y comparaciones múltiples de Bonferroni. Resultados. Tanto en P. major como en P. aduncum se identificó cualitativamente la presencia de fenoles, flavonoides y taninos; además, P. aduncum presentó saponinas. La inhibición de la actividad de la PLA2 del veneno por el extracto total de P. major fue del 45,3%, y sus fracciones mostraron valores de inhibición: LLF-1 con 31,1%, LLF-2 con 66,3% y LLF-3 con 65,5%. En P. aduncum, los valores de inhibición para el extracto total fueron de 86,9%, y sus fracciones presentaron inhibiciones: MF-1 con 34,3%, MF-2 con 67,1% y MF-3 con 54,9%. El análisis estadístico demostró diferencias significativas en la inhibición de la PLA2 (p=0,009) por los extractos. Conclusión. Los ensayos realizados demostraron una asociación entre el efecto antiinflamatorio de los extractos y la inhibición de la PLA2.
Objective. To evaluate the in vitro inhibitory activity of Plantago major "llantén" and Piper aduncum "matico" extracts on phospholipase A2 (PLA2) from the venom of the snake Lachesis muta muta. Materials and methods. We carried out an explanatory study with experimental design. Leaves of P. major and P. aduncum were collected in the province of Huarochirí in Lima, Peru. Then, we prepared alcoholic extracts diluted in distilled water and conducted phytochemical assays, quantification of phenols and flavonoids, thin layer chromatography (TLC) on cellulose and enzymatic activity with PLA2. The ability to inhibit PLA2 with the extracts under study and their fractions was analyzed. The Kruskal Wallis test and Bonferroni multiple comparisons were used during statistical analysis. Results. Phenols, flavonoids and tannins were qualitatively identified in both P. major and P. aduncum; in addition, P. aduncum presented saponins. The inhibition of PLA2 activity of the venom by the total extract of P. major was 45.3%, and its fractions showed the following inhibition values: 31.1% for LLF-1, 66.3% for LLF-2 and 65.5% for LLF-3. The inhibition values for the total extract of P. aduncum were 86.9%, and its fractions showed the following inhibition rates: 34.3% for MF-1, 67.1% for MF-2 and 54.9% for MF-3. Statistical analysis showed significant differences in the inhibition of PLA2 (p=0.009) by the extracts. Conclusion. The tests demonstrated an association between the anti-inflammatory effect of the extracts and PLA2 inhibition.
Subject(s)
Plant ExtractsABSTRACT
Objetivo: Caracterizar las proteínas solubles que se encuentran en la raíz del Lepidium peruvianum G. Chacón, maca, mediante electroforesis unidimensional y electroforesis bidimensional. Diseño: Estudio de tipo observacional y transversal. Lugar: Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición Alberto Guzmán Barrón. Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Perú. Materiales: Raíces de Lepidium peruvianum G. Chacón æmacaÆ de los ecotipos blanco, amarillo y morado, procedentes de Junín que fueron obtenidas a través de la Universidad Nacional del Centro del Perú. Métodos: La extracción de las proteínas totales solubles se realizó con una solución antioxidante, seguida de electroforesis unidimensional y bidimensional para su caracterización. Principales medidas de resultados: Número de proteínas solubles, peso molecular de las proteínas y puntos isoelectricos de las proteínas más abundantes. Resultados: El análisis electroforético unidimensional mostró predominio de 2 proteínas (72 por ciento de las proteínas solubles totales). Una de 22,5 kDa, denominada en el presente trabajo æmacatinaÆ (51 por ciento de la proteína total); la otra de 17,0 kDa (21 por ciento de la proteína soluble total). El mapa electroforético bidimensional mostró que tanto la æmacatinaÆ como la proteína de 17,0 kDa son básicas y presentan 3 isómeros de carga que se distribuyen en un rango de punto isoeléctrico (pI) de 7,1 a 8,2. Conclusiones: Las proteínas solubles mostraron un patrón electroforético complejo, siendo la macatina la proteína más abundante.
Objective: To characterize soluble proteins present in Lepidium peruvianum G. Chacon æmacaÆ root by both unidimensional and bidimensional electrophoresis. Design: Observational and cross-sectional type study. Setting: Alberto Guzman Barron Biochemistry and Nutrition Research Center, Faculty of Medicine, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru. Materials: Roots of Lepidium peruvianum G. Chacon æmacaÆ white, yellow and purple ecotypes, collected in Junin and obtained from Universidad Nacional del Centro del Peru. Methods: Soluble total proteins extraction with an antioxidant solution and characterization by both unidimensional and bidimensional electrophoresis were done. Main outcome measures: Soluble protein number, molecular weight and most abundant proteinsÆ isoelectrical points. Results: The unidimensional electrophoretic analysis showed predominance of two proteins (72 per cent of total soluble proteins): one with 22.5 kDa denominated in the present work as ômacatinaõ (51 per cent of the total protein) and another with 17,0 kDa (21 per cent of total soluble protein). The bidimensional electrophoretic map sample showed that both æmacatinaÆ and the 17,0 kDa protein are basic and display three charge isomers distributed in an isoelectric point (pI) ranging from 7,1 to 8,2. Conclusions: The soluble proteins ecotypes studied showed a complex electrophoretical pattern, being macatina the most abundant protein.
Subject(s)
Electrophoresis, Gel, Two-Dimensional , Electrophoresis , Electrophoresis, Polyacrylamide Gel , Lepidium , Cross-Sectional Studies , Observational Studies as TopicSubject(s)
Rabbits , Animals , Spider Bites/complications , Blood Coagulation , Spider Venoms/pharmacology , SpidersABSTRACT
Se envenenaron conejos Nueva Zelanda mediante inyección intradérmica con veneno de la araña casera L. laeta obtenido mediante electroestimulación, a 2 niveles de dosis y los efectos se evaluaron hasta las 48 horas post-inyección del veneno. Los efectos del envenenamiento fueron cutáneos y sistémicos. Los conejos desarrollaron evolutivamente lesiones cutáneas locales de aspectos eritemato-papular, edema hemorragia puntiforme equimosis y necrosis. Los efectos sistemicos incluyeron anemia, leucocitosis, hemoproteínuria, incremento de los niveles plasmáticos de urea y creatinina y muerte. La emisión de orina hemoproteínurica fue observada después de las 9 horas de envenenamiento, correlacionada con la severidad del envenenamiento. La hemoproteína fue caracterizada química y electroforeticamente como hemoglobina. Se analizan los resultados obtenidos con la aplicación de dosis única de lcc endovenoso de suero anti-loxoscélico comercial luego de 4 horas de envenenamiento
Subject(s)
Rabbits , Animals , Male , Female , Spider Bites , Disease Models, Animal , Spider Venoms/adverse effectsABSTRACT
El veneno de arañas adultas Loxósceles laeta fue obtenido mediante electroestimulación y disección glandular. La distribución electroforética de las proteínas del veneno fue obtenida en gel de poliacrilamida a pH 8.6, obteniéndose 19 y 22 bandas proteicas respectivamente. Mediante electroforesis a pH 7.2 en presencia de dodecil sulfato de sodio de sodio se observaron tan solo 18 y 20 respectivamente. Las muestras estudiadas no producen coagulación del fibrinógeno humano, bovino ni plasma humano citratado. El veneno loxoscélico no hidrolizá los substratos BAPna, TAME ni Chromozym TH lo que demuestra la ausencia de Enzima similar a trombina. La presencia de acción procoagulante in vitro del veneno fue demostrada por la aceleración del tiempo de recalcificación del plasma humano. Se discute el rol de esta actividad en el envenenamiento loxoscélico
Subject(s)
History, 20th Century , Spider Bites/complications , Electrophoresis, Polyacrylamide Gel , Spiders/classification , Arthropod Venoms/isolation & purification , Arthropod Venoms/analysis , PeruABSTRACT
Se ha investigado el contenido proteico y varias actividades enzimáticas en el veneno de la araña casera Loxosceles laeta. La cantidad de proteína encontrada en 3 de los 4 lotes de arañas en estudio fue de 38 ug por especímen. Asi mismo, se ha encontrado actividad de 5 nucleotidasa, fosfatasa ácida y alcalina, ADPasa y ATPasa, enzima cascinolítica y hialuronidasa. En cambio, no se ha registrado actividad de exonucleasa, endonucleasa, enzima semejante a trombina, enzima fibrinolítica, ni actividad esterásica
Subject(s)
Animals , Spider Bites/enzymology , Nucleotidases/metabolism , Proteins/metabolism , Spider Venoms/metabolismABSTRACT
Se obtuvo veneno de arañas Loxosceles sp. procedente de dos localidades del Departamento de Lima (Perú): Urb. Santa María de Chosica y Santa Rosa de Quives (Km. 60). La técnica de estimulación eléctrica para obtención de veneno fue modificado con la finalidad de descartar la contaminación con regurgitado gástrico, obteniéndose 0.33 a 0.76 ul/araña adulta, el que fue utilizado en los ensayos de toxicidad aguda en conejos, y en los estudios bioquímicos. Un segundo método alternativo para la obtención de extractos tóxicos utilizado fue la microdiseccción y homogenización glandular total. La dosis letal media, fue estimado a diferentes intervalos de tiempo, utilizando un programa computarizado del método de transformación en probits. La LD50 intraperitoneal y endovenosa obtenida en ratones, fue de 0.299 y 0.165 glándulas/ratón, respectivamente. Un método de envenenamiento por picadura directa fue desarrollado para el estudio de toxicidad aguda en conejos, y los resultados fueron comparados con los producidos por inyección del veneno obtenido mediante estimulación eléctrica. Los efectos cutáneos del Loxoscelismo en conejos fueron tipificados y biopsias de lesiones en diferentes estadíos evolutivos fueron analizados mediante estudio histológico. El cuadro sistémico en conejos estuvo caracterizado por hemoproteinuria, ausencia de hematuria, lesiones cutáneas variables y muerte. Se determinó la potencia neutralizante in vitro del suero antiloxoscélico comercial (INS, Perú), demostrándose que 0.3ml. del suero, inactivan los efectos letales de una glándula de veneno loxoscélico. Se descarta la probable acción protectora del suero de rata sobre el efecto letal del veneno loxoscélico en el ratón.
Subject(s)
Animals , Rats , Mice , Rabbits , Spider Venoms/pharmacologyABSTRACT
Se ha estudiado las caracteristicas de una 5'nucleotidasa del veneno de Bothrops atrox (L.). La enzima muestra variacion de pH optico en un rango que fluctua entre 6,2 a 8,2 con buffer Tris-HCI y un pico a 8,6 con buffer Glicina-NaOH, mostrando una mayor afinidad con este ultimo.Estos valores de actividad son modificados por accion de magnesio 5 mM. Los iones calcio producen inhibicion de actividad enzimatica en grado variable, mientras que el magnesio es un ion activador, evidenciandose competencia ionica a valores de pH mayores que 8,6. Asi mismo se ha encontrado que la enzima es sensible al efecto termino, a la accion de agentes quelantes como citrato de sodio, EDTA y a L-aminoacidos como: glicina, prolina, ac. glutamico y lisina.En cambio los agentes reductores 2-Mercaptoetanol y L-Cisteina causan notable incremento de la actividad de la enzima a pH 8,6 con buffer Tris-HCl. La adicion de magnesio 5 mM e mezclas de reaccion que contienen L-aminoacidos incrementan la velocidad de hidrolisis